NanoDrop One光度計的使用流程主要包括以下幾個步驟:
1. 開機與初始化
開機:接通電源,打開NanoDrop One光度計的電源開關,等待儀器完成初始化。
檢查界面:初始化完成后,屏幕上會出現主界面,顯示常用的測量選項分類,如核酸(Nucleic Acid)、蛋白質(Protein)等。
2. 選擇檢測方法
核酸測量:如果測量的是DNA或RNA,選擇“Nucleic Acid”選項,然后進一步選擇具體的核酸類型,如dsDNA(雙鏈DNA)、ssDNA(單鏈DNA)或RNA。
蛋白質測量:如果測量的是蛋白質,選擇“Protein”選項,然后選擇蛋白質定量方法,如Protein A280(基于280nm吸光度的蛋白質定量)。
3. 基座清潔與調零
基座清潔:使用移液器吸取2μL蒸餾水(或去離子水)加到檢測基座上,將樣品臂放下,浸泡2-3分鐘,然后用無塵紙或擦鏡紙將檢測基座擦拭干凈。
調零:在清潔后的基座上,再次使用移液器加2μL蒸餾水(或選擇與樣品對應的緩沖液,如Elution Buffer),放下探頭。如果“Blank”(空白檢測)按鈕右側顯示為“ON”,則儀器將自動進行調零;如果顯示為“OFF”,需要手動點擊“Blank”按鈕進行調零。
4. 樣品測量
加樣:將加樣表面和上探頭的蒸餾水用濾紙吸去,然后使用移液器吸取2μL樣品加到檢測基座上。
測量:放下上探頭,如果“Measure”(測量)按鈕右側顯示為“ON”,則儀器將自動進行測量;如果顯示為“OFF”,需要手動點擊“Measure”按鈕進行測量。
5. 查看結果
顯示結果:測量結束后,屏幕左側會顯示掃描峰圖,右上角列表會顯示檢測值,包括濃度、A260/A280(對于核酸)或A280吸光度(對于蛋白質)等參數。
詳細數據:向左滑動屏幕可以查看詳細數據,包括濃度、A260/A280、A260/A230(對于核酸)以及260nm、280nm等波長的檢測值。
6. 連續測量與更換樣品
連續測量:如果需要測量多個樣品,可以在測量完一個樣品后,將加樣表面和上探頭的樣品用濾紙吸去,然后加上下一個樣品,重復測量步驟。
更換空白對照:如果更換了不同的空白對照溶液(如緩沖液),需要吸去樣品,清潔基座,加上新的空白對照溶液,重復調零和測量步驟。
7. 數據導出與結束實驗
數據導出:實驗完成后,如果需要導出數據,可以插入USB驅動器,點擊屏幕上的導出按鈕,選擇需要導出的數據信息(如測量數據、光譜數據、查看器文件等),點擊確認后數據傳輸完成。
結束實驗:點擊屏幕右下角的結束實驗按鈕,完成整個測量過程。
8. 儀器清潔與維護
清潔儀器:測量結束后,使用移液器吸取2μL蒸餾水加到檢測基座上,放下上探頭浸泡30秒,然后用無塵紙或擦鏡紙清潔上下探頭和基座。
維護儀器:定期檢查儀器的性能,確保儀器處于良好狀態。避免儀器受到陽光直射、強風吹拂或潮濕環境的影響。
注意事項
樣品準備:在測量前,確保樣品充分混勻,避免氣泡和雜質的影響。
加樣量:加樣量一般為2μL,但對于粘稠的樣品,可適當增加加樣量,但需保證樣品不溢出。
避免重復測量:在測量過程中,避免重復點擊“Measure”按鈕,如果需要重復測量,應先擦去樣品,重新加樣后再進行測量。
樣品類型選擇:在測量蛋白質時,確保正確選擇樣品類型,以便儀器能夠準確計算濃度。
通過以上步驟,您可以正確使用NanoDrop One光度計進行核酸和蛋白質的濃度與純度分析。