Raji 細胞作為人類 Burkitt 淋巴瘤 B 淋巴細胞模型，具有嚴格懸浮生長特性，是腫瘤機制研究、免疫治療靶點驗證及抗淋巴瘤藥物篩選的關鍵工具。本文系統解析其懸浮生長核心特征，結合旋轉壁式生物反應器（RWV）與隨機定位機器（RPM）兩種主流模擬微重力裝置，闡述技術適配參數、操作規范及應用場景，為 Raji 細胞在微重力環境下的高效培養與研究提供技術支撐。
1 引言
Raji 細胞因保留 B 淋巴細胞的免疫表型（如 CD19、CD20 陽性）及腫瘤細胞惡性增殖特性，被廣泛用于淋巴瘤發病機制、CAR-T 細胞殺傷效率評估等領域。常規常重力懸浮培養中，細胞易因沉降導致營養分布不均，而模擬微重力環境可通過抵消重力影響，構建更接近體內腫瘤微環境的三維培養體系，提升細胞功能研究的準確性。因此，明確 Raji 細胞懸浮特性與微重力裝置的適配技術，是推動其從基礎研究向臨床轉化的關鍵環節。
2 Raji 細胞懸浮生長核心特性
2.1 生長形態與貼壁依賴性
Raji 細胞在體外培養中呈現完全懸浮生長狀態，具體特征包括：
形態：典型球形或類球形，直徑 12-15 μm，無偽足或突起結構，與貼壁細胞（如 HeLa 細胞）的梭形 / 多邊形形態顯著差異；
聚集體特性：隨培養時間延長形成松散聚集體，直徑通常 < 100 μm（常重力下），聚集體內部細胞間隙較大，無緊密連接，通過輕柔吹打可分散為單細胞懸液，避免機械損傷；
貼壁依賴驗證：在未包被的普通培養瓶中，即使靜置培養 48 h，細胞仍保持懸浮狀態，無任何細胞附著于瓶壁，符合 “懸浮細胞無固相支持需求” 的核心定義。
2.2 常規懸浮培養關鍵參數
常重力下采用搖瓶或攪拌式生物反應器培養時，需控制以下參數以保障細胞活性：
培養基：基礎配方為 RPMI 1640（含 25 mM HEPES 緩沖液），添加 10%-15% 胎牛血清（FBS，需經 56℃ 30 min 滅活）、1% 青霉素 - 鏈霉素（100 U/mL 青霉素 + 100 μg/mL 鏈霉素），pH 維持 7.2-7.4；
攪拌 / 搖床參數：搖瓶轉速 80-120 rpm（軌道直徑 25 mm），攪拌式反應器攪拌速率 100-150 rpm，確保細胞均勻懸浮，避免沉降導致的局部缺氧；
增殖動力學：常重力下倍增時間約 24-30 h，對數生長期細胞密度可達 1×10?-3×10? cells/mL，平臺期密度因營養限制穩定在 3×10?-5×10? cells/mL，無接觸抑制現象（圖 1）。
圖 1 Raji 細胞常重力懸浮培養生長曲線
（橫坐標：培養時間 /h；縱坐標：細胞密度 ×10? cells/mL；曲線分為延遲期、對數期、平臺期，對數期斜率對應倍增時間）
3 模擬微重力培養裝置的技術適配
3.1 旋轉壁式生物反應器（RWV）適配方案
RWV 通過旋轉產生的離心力與重力平衡，構建低剪切力微重力環境，適配 Raji 細胞時需重點優化以下技術參數：
3.1.1 裝置核心參數設定
艙體規格：選用高徑比（HARV）型 RWV，內艙直徑 50 mm、高度 250 mm，有效培養容積 100 mL，材質為醫用級聚碳酸酯（PC），內壁經等離子體處理（表面粗糙度 Ra<0.1 μm），減少細胞黏附；
轉速與剪切力控制：Raji 細胞對剪切力耐受上限約 0.4 dyne/cm2，通過伺服電機將轉速設定為 8-15 rpm，結合流體動力學模擬，確保艙內剪切力均勻穩定在 0.2-0.3 dyne/cm2，避免聚集體破裂；
氣體環境：通過艙體側壁透氣膜（聚四氟乙烯材質，孔徑 0.22 μm）通入 5% CO?+95% 空氣混合氣體，溶解氧（DO）維持 30%-60%，溫度控制在 37±0.5℃。
3.1.2 培養效果與數據驗證
在上述參數下，Raji 細胞培養 72 h 后：
細胞密度：可達 5×10?-8×10? cells/mL，較常重力搖瓶培養提升 2-3 倍；
細胞活力：臺盼藍染色法檢測活力 > 90%，與常重力培養（活力 88%-92%）無顯著差異；
功能保留：流式細胞術檢測 CD20 陽性率 > 95%，維持淋巴瘤細胞典型免疫表型。
3.2 隨機定位機器（RPM）適配方案
RPM 通過三維隨機旋轉干擾重力矢量，適配對剪切力敏感的 Raji 細胞聚集體培養，技術要點如下：
3.2.1 旋轉模式與參數優化
旋轉框架：采用 X/Y/Z 三軸正交框架，每軸配備步進電機（步距角 1.8°），通過 PID 算法控制旋轉角速度 1-3°/s，時間平均重力水平降至 10?3 g 以下；
旋轉模式選擇：針對 Raji 細胞聚集體易碰撞破碎的問題，采用 “間歇旋轉模式”—— 旋轉 15 s 后停止 5 s，循環周期 20 s，減少持續旋轉帶來的累積剪切效應；
樣品裝載：使用 20 mL 無菌離心管（含 10 mL 細胞懸液），管內加入 1×10? cells/mL 初始密度的 Raji 細胞，避免液面晃動導致的細胞損傷。
3.2.2 適配性核心優勢
三維聚集體形成：培養 96 h 后，Raji 細胞形成直徑 150-200 μm 的致密聚集體，內部細胞排列更接近體內腫瘤球結構，VEGF（血管內皮生長因子）分泌量較常重力提升 1.8 倍；
免疫分子表達：流式細胞術檢測顯示，RPM 培養的 Raji 細胞 CD40 表達量較常重力提升 10%-15%，為 “微重力調控腫瘤免疫靶點” 研究提供理想模型。
4 Raji 細胞模擬微重力培養關鍵操作規范
4.1 預處理與無菌控制
細胞預處理：常重力培養至對數期（密度 2×10? cells/mL），取 10 mL 細胞懸液，500×g 離心 5 min，棄上清后用新鮮 RPMI 1640 培養基重懸，調整密度至 1×10? cells/mL，避免初始密度過高導致聚集體過大；
裝置無菌：RWV 艙體或 RPM 樣品管需經 121℃高壓滅菌 20 min，使用前用 75% 乙醇擦拭外表面，操作全程在生物安全柜內進行，防止支原體或細菌污染；
污染監測：啟用裝置集成的 ATP 污染監測模塊，每 12 h 檢測一次，報警閾值設為 5 pg/mL（低于常規細胞的 10 pg/mL），因 Raji 細胞對污染更敏感，需提前干預。
4.2 過程監測與參數調整
光學監測：通過裝置觀察窗（RWV）或取樣鏡檢（RPM），每日記錄細胞形態與聚集體大小，當聚集體直徑超過 200 μm 時，適當提高 RWV 轉速（每次增加 2 rpm）或縮短 RPM 旋轉時間（調整為旋轉 12 s、停止 8 s）；
生化參數監測：內置微型 pH 電極與葡萄糖傳感器，每 24 h 記錄數據，當葡萄糖濃度 <1.5 g/L 或乳酸濃度> 20 mmol/L 時，通過 perfusion 灌流系統補充新鮮培養基，灌流速率為 0.5 倍艙體體積 / 天；
應急處理：若 DO 濃度突然下降（<20%），立即檢查透氣膜是否堵塞，必要時更換艙體或通入純氧（濃度≤21%），避免細胞缺氧死亡。
4.3 收獲與質控
細胞收獲：RWV 培養結束后，通過艙體出口將細胞懸液導入 50 μm 孔徑濾網，過濾去除過大聚集體（直徑 > 200 μm），收集濾液后 500×g 離心 5 min，棄上清得細胞沉淀；RPM 培養則直接離心收獲，無需過濾；
質控指標：收獲后檢測細胞活力（需 > 85%）、免疫表型（CD19/CD20 陽性率 > 90%）及功能（如 MMP-9 分泌量），確保細胞質量符合后續實驗需求。
5 應用場景與技術價值
5.1 腫瘤機制研究
侵襲能力評估：在 RWV 裝置中構建 Raji 細胞三維聚集體，通過 Transwell 實驗檢測其侵襲能力，結果顯示微重力下聚集體的 MMP-9 分泌量較常重力提升 2-3 倍，證實微重力可增強淋巴瘤細胞的侵襲潛能，為腫瘤轉移機制研究提供新視角；
信號通路分析：通過 Western blot 檢測發現，RPM 培養的 Raji 細胞中 NF-κB 通路關鍵蛋白（p65）磷酸化水平提升 40%，揭示微重力調控腫瘤細胞增殖的分子機制。
5.2 抗淋巴瘤藥物篩選
藥物敏感性檢測：在芯片級微重力裝置（容積 100-500 μL）中培養 Raji 細胞，加入不同濃度利妥昔單抗（0.1-10 μg/mL），培養 72 h 后檢測細胞活力，計算 IC??值；結果顯示，微重力環境下 IC??（1.2 μg/mL）與臨床患者有效藥物濃度（1.0-1.5 μg/mL）的相關性較常重力（IC?? 2.5 μg/mL）提升 30%，顯著提高藥物篩選的準確性；
聯合用藥評估：利用 RWV 裝置模擬體內微環境，評估利妥昔單抗與阿霉素的聯合殺傷效果，發現微重力下聯合用藥的協同指數（CI）為 0.72（常重力 CI 0.95），證實微重力培養可更精準反映聯合用藥的協同作用。
5.3 細胞治療研究
作為 CAR-T 細胞的靶細胞模型，微重力培養的 Raji 細胞可用于評估 CAR-T 細胞的殺傷效率：將 CD19-CAR-T 細胞與 RWV 培養的 Raji 細胞按 1:1 效靶比共培養，4 h 后殺傷率達 85%（常重力共培養殺傷率 72%），更接近體內 CAR-T 治療的實際效果，為 CAR-T 細胞產品的功能驗證提供優化模型。
6 挑戰與展望
6.1 當前技術局限
聚集體均一性：RWV 培養中約 10%-15% 的聚集體直徑超過 200 μm，導致營養與氧氣供應不均，影響細胞功能一致性；
長期培養穩定性：RPM 培養超過 120 h 后，細胞活力下降至 75% 以下，可能與代謝廢物積累或培養基成分耗竭相關；
成本與規模化：大型 RWV 裝置（10 L 級）成本較高，難以滿足高通量實驗需求。
6.2 未來發展方向
智能化調控：引入 AI 算法，基于實時監測數據（如聚集體大小、葡萄糖濃度）自動調整轉速、灌流速率等參數，提升聚集體均一性至 90% 以上；
多模態監測集成：融合光聲成像與流式細胞術，實現微重力培養過程中細胞形態、分子表達的實時可視化監測；
微型化與高通量：開發芯片級微重力裝置陣列（如 96 孔板規格），降低單樣品培養成本，適配高通量藥物篩選需求。
7 總結
Raji 細胞的嚴格懸浮生長特性使其成為模擬微重力培養的理想模型，通過優化 RWV 與 RPM 裝置的核心參數（如轉速、旋轉模式、剪切力），可實現細胞的高效培養與功能保留。該技術不僅為淋巴瘤機制研究提供更接近體內的實驗體系，還能提升抗淋巴瘤藥物篩選與 CAR-T 細胞功能驗證的準確性，具有重要的基礎研究與臨床轉化價值。未來通過智能化與微型化技術創新，將進一步拓展 Raji 細胞在微重力環境下的應用場景，推動腫瘤研究與細胞治療領域的發展。
