DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）染色作為一種常用的細胞核熒光染色方法，因其能夠特異性地結合DNA雙螺旋小溝區域并發出明亮的藍色熒光，而被廣泛應用于懸浮細胞的核染色實驗中。以下是DAPI染懸浮細胞的詳細步驟及注意事項：
一、實驗步驟
樣品準備
確保懸浮細胞已經通過適當的固定劑進行固定。固定劑的選擇和固定時間對細胞形態和DAPI染色效果有顯著影響，需根據具體細胞類型進行優化。
在染色前用PBS（磷酸鹽緩沖液）等緩沖液平衡樣品，以去除殘留的固定劑。
染色液配制
使用DAPI染色液，其工作濃度一般推薦為0.5~10μg/ml。
如果使用的是濃縮的DAPI染色液，需要用無菌的PBS或生理鹽水稀釋到適當的工作濃度。
染色
對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3倍的DAPI染色液。
充分混勻后，室溫放置58分鐘（也有說法為1020分鐘），使DAPI充分結合到DNA上。
洗滌
染色后，使用無菌的PBS或生理鹽水輕輕洗滌細胞23次，每次35分鐘。
洗滌步驟要徹底，以去除未結合的DAPI和殘留的固定劑。
觀察
洗滌后，可以直接在熒光顯微鏡下觀察。
也可以將細胞封片后進行觀察，使用抗熒光淬滅封片液可以減緩熒光淬滅。
激發波長通常為360nm，發射波長為460nm。
二、注意事項
安全性：DAPI對人體有一定刺激性，操作時應戴手套并注意適當防護。在操作過程中，應嚴格遵守實驗室安全規程，避免DAPI對操作人員的潛在危害。
染色效果：DAPI染色的效果受到多種因素的影響，如固定劑的選擇、固定時間、染色液濃度、染色時間等。因此，在進行實驗時需要根據具體細胞類型和實驗需求進行優化。
觀察時機：熒光染料存在淬滅問題，建議染色后盡快檢測。如果無法立即觀察，可以使用抗熒光淬滅封片液來減緩熒光淬滅。
實驗條件：實驗過程中應確保溫度、濕度等實驗條件穩定，以避免對實驗結果產生干擾。
通過以上步驟和注意事項，可以成功地對懸浮細胞進行DAPI染色，并觀察到細胞核的形態和分布。DAPI染色不僅可以幫助科學家直觀地觀察細胞形態和結構，還能揭示細胞內分子的定位與相互作用，為細胞生物學和醫學研究提供有力支持。
