腫瘤類器官培養樣本的要求相當嚴格,以下是對樣本取材、處理、運輸等方面的詳細要求:
一、樣本取材
倫理與法律遵守:涉及人源組織的研究取材必須遵守相關法律法規,在取得倫理證明并獲得患者的知情同意后取材。
樣本來源:腫瘤類器官培養的細胞來源主要為外科手術切除樣本、內鏡活檢樣本、穿刺樣本以及含有腫瘤細胞的惡性積液。
取材方法:
活檢樣本:在確診為腫瘤的區域選擇超聲或CT引導下的穿刺活檢方法,使用適當規格的針(如18G針)進行穿刺,收集足夠的樣本。另外,還可以進行支氣管鏡肺活檢等,提供適量的腫瘤組織作為樣本。
切除組織樣本:在取出新鮮手術樣本后,應盡快進行后續處理。
樣本質量要求:
應優先選取生長旺盛、無壞死的區域進行取材。
取得的樣本應具有適當的體積(如長寬約1.52cm,總體積約為35cm3),以便于后續處理和分析。
二、樣本處理
清洗:使用無菌生理鹽水對樣本進行清洗,重復多次直至樣本上沒有明顯血漬和污漬。
修整:使用無菌手術剪將目標組織修剪成適當的組織塊。
消化:采用適當的消化方法(如酶解法、EDTA法等)對樣本進行消化,以獲得足量的活性較強的細胞。消化時間應根據樣本類型和消化方法進行調整,并定期進行鏡檢以觀察消化情況。
三、樣本運輸
溫度控制:樣本轉運過程中應盡量將溫度控制在4~8℃范圍內,以保持樣本的活性。
運輸容器:選擇適合樣本和離心管大小的泡沫箱進行運輸,并在泡沫箱底部放置冷凍的冰袋以保持冷藏溫度。同時,應確保樣本管直立狀態,以防止管口污染。
時間限制:在從取下樣品到送達實驗室的過程中,應盡量確保時間不超過48小時。超過這個時限后,樣品中的細胞活力會顯著下降,從而影響實驗的成功率。
四、其他注意事項
樣本保存:若樣本不能及時處理,應放入對應的組織保存液中。如果需要低溫運輸保存,可在保存液中額外添加適當的物質(如Y-27632),以減少腫瘤干細胞的凋亡。
樣本信息:為確保樣本的準確性和追溯性,應填寫完整的送檢單,并在樣本管上標明編號、姓名、癌種、檢測內容等信息。
總結
腫瘤類器官培養樣本的要求涉及取材、處理、運輸等多個方面。只有嚴格按照這些要求進行操作,才能確保樣本的質量和實驗的成功率。