樣本采集與處理

保持樣本活性：樣本采集后應盡快處理，減少在非生理環境下的時間。例如，對于腫瘤組織樣本，最好在手術切除后 1 - 2 小時內開始處理。可以將樣本保存在含有適當緩沖液或培養基的無菌容器中，置于冰上運輸，以維持細胞活性。

嚴格無菌操作：在樣本處理過程中，如組織切割、酶消化等步驟，必須在無菌超凈臺內進行。使用的器械和試劑都要經過嚴格消毒，避免細菌、真菌或支原體污染。例如，在處理腸道組織樣本時，對剪刀、鑷子等器械要進行高溫高壓滅菌。

精準組織消化：消化酶的選擇和使用濃度、時間要根據樣本類型精準控制。過度消化可能會破壞細胞表面受體和細胞間連接，影響類器官的形成。比如，對于肝臟組織樣本，膠原酶消化時間過長可能導致肝細胞損傷，一般消化時間控制在 30 - 60 分鐘為宜。

培養基與營養物質

合適的培養基配方：根據不同類器官的特性選擇或定制培養基。例如，腸道類器官培養需要添加表皮生長因子（EGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）等生長因子，以及 N - 乙酰半胱氨酸（NAC）等抗氧化劑。培養基的成分和比例要準確配制，確保營養物質和生長因子的濃度合適。

營養物質補充與更新：定期更換培養基，一般 2 - 3 天更換一次，以保證類器官持續獲得充足的營養和生長因子。同時，要注意營養物質的添加順序和方式。例如，在添加一些對光、熱敏感的營養成分時，要盡量避免強光照射和溫度過高。

培養環境條件

件溫度和氣體濃度控制：類器官通常在 37°C、5% CO?的環境下培養。培養箱的溫度和二氧化碳濃度要定期校準，確保環境穩定。例如，溫度波動可能會影響細胞代謝和類器官的生長速度，二氧化碳濃度異常會導致培養基 pH 值改變，影響細胞生存。

防止污染和震動干擾：保持培養環境的清潔，避免灰塵和微生物污染。同時，要將培養容器放置在平穩的位置，減少震動。例如，頻繁的震動可能會破壞類器官的結構，影響其正常發育。

細胞間相互作用與基質支持

模擬體內微環境：在培養過程中，要考慮細胞間的相互作用和細胞與基質的關系。可以添加細胞外基質成分，如 Matrigel，來模擬體內的細胞外基質環境。Matrigel 的濃度和使用量要根據類器官的類型和實驗目的進行調整，以提供合適的支撐和信號傳導。

共培養體系建立（如果需要）：對于一些復雜的類器官培養，可能需要建立共培養體系，如將免疫細胞與上皮類器官共培養。在這種情況下，要注意細胞比例、接種順序和相互作用方式，以確保共培養體系的穩定性和有效性。

觀察與監測

定期形態觀察：使用倒置顯微鏡定期觀察類器官的形態、大小和結構變化。記錄類器官從初始細胞聚集到形成三維結構的過程，以及是否出現異常形態，如壞死、空泡化等現象。例如，正常的腸道類器官呈球形或囊狀，有明顯的腔結構。

功能檢測與標志物分析：結合免疫組化、基因表達分析等方法，檢測類器官的功能標志物。例如，檢測腸道類器官的腸堿性磷酸酶（IAP）表達，來評估其腸上皮細胞的功能狀態。根據檢測結果及時調整培養條件。